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PCR耗材中如何选择反应板


PCR 板通常采用96孔和384孔的形式,其次为 24孔和48孔。使用的PCR仪和正在进行的应用的性质将决定PCR 板是否适合您的实验。


一、不同裙边类型

PCR 板的“裙”是板周围的板。裙边可为反应体系构建时的移液过程提供较好的稳定性,以及在进行自动机械处理时提供更好的机械强度。PCR 平板可分为无裙边,半裙边和全裙边。

无裙边板缺少周围的面板(图A)。这种形式的反应板可与绝大多数PCR仪和实时PCR仪的模块适配,但不适用于自动化应用。

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半裙边板在板的边缘周围具有短的边缘(图B),在移液过程中提供足够的支撑,Applied Biosystems PCR仪大多数均采用半裙边板。

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全裙边的 PCR 板具有覆盖板高度的边缘面板(图C)。这种板形式适用于具有突出模块的PCR仪(可有利于自动化操作),可安全稳固适配。全裙边还增强了机械强度,使其非常适合在自动化工作流程中使用机器人平台。

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二、不同板面类型

板的板面是指其上表面。

全平面板设计适用大多数PCR仪,便于密封和处理。

边缘凸起板设计对于某些PCR仪器(如Applied Biosystems PCR仪)具有最佳适配性,有助于在不需要适配器的情况下平衡热盖压力,确保最佳的的热传递和可靠的实验结果。

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具有全平面板和凸起边缘的PCR板(如图)


三、管体不同颜色

PCR板通常可提供多种不同的颜色形式,以便于对于样品的视觉区分和鉴别,特别是在高通量实验中。尽管塑料的颜色对DNA扩增没有影响,但在设置实时荧光定量PCR的反应时,与透明耗材相比,我们更推荐使用白色塑料耗材或者经磨砂处理的塑料耗材,以实现灵敏和准确的荧光检测。

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qPCR使用透明和白色耗材的结果比较(A)与透明孔相比,白色孔Ct值更低(灵敏度更高)。(B)白色孔在技术重复中也表现出更高的一致性。

白色耗材通过阻止荧光折射出管来提高qPCR数据的灵敏度和一致性。折射被最小化时,更多的信号被反射回检测器,从而增加信噪比。此外,白色管壁可阻止荧光信号传递至PCR仪模块,避免被吸收或不一致地反射荧光信号,从而使重复实验中的差异降至最低。

不同品牌仪器,由于荧光检测器位置设计不同,请参考推荐的耗材。通常Applied Biosystems PCR仪,我们推荐您使用原装的磨砂孔PCR板,这些耗材经过研发严格测试,可确保您获得准确可靠的实验数据。而对于Bio-Rad CFX或Roche 480荧光定量PCR仪,推荐使用白色PCR板。

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四、不同切角位置

切角是对PCR板的一个角缺失,取决于所需要适配的仪器。切角可能位于96孔板的H1,H12或A12位置,或384孔板的A24位置。

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带有切角的PCR板(如图)


五、ANSI/SBS形式

为了兼容不同的自动化液体处理高通量系统,PCR板应符合美国国家标准协会(ANSI )和生物分子科学学会(SBS,现属实验室自动化和筛选协会( SLAS))。符合ANSI/SBS的板具有标准的尺寸,高度,孔位置等,因而有助于于自动化处理。


六、孔边缘

PCR 板的共同特点是在孔周围有一个凸起的边缘。该设计可有助于用封板膜进行密封以防止蒸发。

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PCR板凸起的孔边缘(如图)


七、标记

PCR板上的字母数字标记将有助于识别单个孔及对应样品的位置。通常为原色(图A),白色或黑色(图B)字迹的凸起字母数字标记,以便于查看。

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